Đặt vấn đề: Hiện nay, việc xây dựng phương pháp phân tích để kiểm soát các chất salbutamol, ractopamine, clenbuterol có trong mẫu thịt gia súc với độ chọn lọc, độ nhạy và độ chính xác cao là vấn đề rất cần thiết. Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng, thẩm định quy trình phân tích đồng thời salbutamol, ractopamine, clenbuterol có trong mẫu thịt heo, bò bằng phương pháp LC-MS/MS theo hướng dẫn EC-657/2002, AOAC 2002; ứng dụng quy trình đã thẩm định để phân tích các mẫu thịt. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: chất chuẩn salbutamol, ractopamine, clenbuterol, mẫu thịt heo, bò tại tỉnh Kiên Giang, xây dựng quy trình định lượng salbutamol, ractopamine, clenbuterol bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ. Kết quả: các thông số khối phổ thích hợp xác định phân mảnh salbutamol (240,09 → 148,04), ractopamine (302,14 → 164,15), clenbuterol (277,05 → 203,02); thông số sắc ký: cột Algilent Elipse Plus C18 (4,6 x 150 mm; 3,5 µm), chương trình rửa giải gradient, tốc độ dòng 0,8 mL/phút, thể tích tiêm 10 μL, thời gian tiêm mẫu 8 phút. Phương pháp được thẩm định với khoảng tuyến tính 0,5 - 40 ppb với R² > 0,99, độ thu hồi (87,7 – 104,4 %), độ chính xác liên ngày (RSD < 6,4 %) tốt, giá trị LOD và LOQ lần lượt là 0,0001 - 0,005 ppb và 0,0004 - 0,020 ppb. Kết quả phân tích 10 mẫu thịt bò thị trường, có 04 mẫu tìm thấy dư lượng của salbutamol nhưng dưới 0,5 ppb. Kết luận: đã phát triển quy trình phân tích có tính chọn lọc, độ nhạy, chính xác cao để định lượng đồng thời salbutamol, ractopamine, clenbuterol trên nền mẫu thịt gia súc với kết quả phân tích trên 10 mẫu thịt bò thị trường phát hiện có 04 mẫu tìm thấy dư lượng salbutamol.